謎の生命体を監視するため、防衛省特務部から派遣された男性。階級は一等陸佐。自らも教員免許を持っている事から、物語開始間もなくして3年E組に「体育教師という名の暗殺技術指導員」として赴任する。一部のファンからは「作中はイケメン扱いされてるけど、どこがイケメンなの？」「イケメンじゃない」などの理由で不人気なようです。

物語の舞台となる、椚ヶ丘中学校3年E組の担任教師に就任した謎の超生物。月の大部分を破壊し、翌年3月には全人類を死滅させると予告しているにもかかわらず、なぜかそれまでの間「3年E組の担任教師ならやってもいい」と申し出た事から、物語が始まる。一部のファンからは「この作品が嫌いだが、殺せんせーはその象徴」「薄っぺらい」「行動原理や出自など、謎が多い」「ピンクになったとき気持ち悪かった」などの理由で不人気なようです。

椚ヶ丘中学校3年E組の女子生徒。暗殺ではサポートに回る事が多い生徒の一人。クラスの中でも感情を表に出さないことが多い、ドライで自己主張をしない仕事人。一部のファンからは「ツンデレだから」「キャラ設定が暗い」などの理由で不人気なようです。

椚ヶ丘中学校3年E組の生徒。暗殺では個人主義の強い生徒の一人で、とくに戦略立案に優れており、他の能力もバランスが取れている。一部のファンからは「いつもイキッてて好きじゃない」「正確にムラがありすぎる」などの理由で不人気なようです。

椚ヶ丘中学校3年E組の生徒の一人で、物語の語り部にして、実質的な主人公です。「暗殺教室」メンバーの一人として、殺せんせーを狙っています。一部のファンからは「今までの苦労とかみんなの気持ちとかを考えずに急に過去聞いた瞬間殺せんせー助けよう、ってなったのは流石におかしいと思う」「あまり性格がいい方とは思わない」などの理由で不人気なようです。

物語の舞台である椚ヶ丘中学校3年E組にやってきた英語教師で、実は政府から殺せんせー暗殺のために派遣されてきたプロの殺し屋。そのグラマラスな体と十カ国語を自在に操る語学力・交渉術を駆使するハニートラップが得意技で、世界中で暗殺を成功させてきた。一部のファンからは「初登場イメージ悪すぎ」「設定が破綻してる」などの理由で不人気なようです。

E組が始まる2学年の3月だけ担任だった女性教師。優しい性格で生徒達からも慕われていたが、彼らが3年に進級した際には学校から姿を消しておりその後の消息はわかっていません。一部のファンからは「性格好きになれん」「いてもいなくてもかわらないキャラ」などの理由で不人気なようです。

本作のヒロインで、椚ヶ丘中学校3年E組の生徒の1人。クラスの標的である超生物に「殺せんせー」と名付けた張本人です。陽気な性格かつ可愛らしい系の美少女であるため、男子の「クラスで気になる女子ランキング」は第4位になっています。一部のファンからは「可愛いいけど性格気持ち悪い」「そこまで可愛いと思ったことはない」「個人の意見だけど性格悪いよね」などの理由で不人気なようです。

くぬどんは椚ヶ丘学園のマスコットキャラクターで、外面は良いが、E組の事を蔑んでおり、何かと当たりが強い。本誌には登場せず、単行本のフリースペースに登場して椚ヶ丘学園のあれこれを読者にレクチャーする役割を担っていますが、アニメではまさかのがっつり本編登場。「おしえて！くぬどん」というミニコーナーでE組や椚が丘学園について解説しています。しかし一部のファンからは「普通に無理、クズでしかない」「E組に失礼な発言しすぎ私は結構嫌い」「こいつ邪魔…暗殺教室で、唯一嫌い」などの理由で不人気なようです。